根据生肖特征和文化寓意，虎、龙等虽与“愁眉苦脸”有关联但更多强调其积极面，而马因象征辛勤劳动和过度劳累的面部表情常被比喻为“愁眉苦脸”，狗也因其情感敏感易流露担忧或不安的表情而被用来形容此状态。“兔”也有时被认为是“最愁容满面”，特别是由于胆小多思及下垂耳朵的外貌特点。“愁眉苦脸”并非特指某一生肖绝对性地贴切，而是通过不同联想形成的综合印象。
虎：
老虎额头上的王字花纹常被形容为紧锁眉头，仿佛在表达一种“愁眉苦脸”的模樣。
龙：
属龙人具有强大的能量和急躁、渴望的特点，他们的热情像寓言中龙口中喷出的火那样燃烧，但这种描述更多是强调其积极的一面而非“愁眉苦脸”，不过从某种角度看，“龙”也代表了威严与力量感，有时可间接联想到严肃或凝重的表情。
羊/牛（字形相似性）：
- 羊：“愁”字的下面是个“心”，而羊字的下面也是“心”，看起来就像是羊在愁眉苦脸，这是基于汉字的字形来解释的一种有趣且巧妙的联系。
- 牛：常常被描绘为勤劳而辛苦的动物，其没有精神的表情往往显得很忧虑，这与“愁眉苦脸”的形象相吻合，牛作为十二生肖中的一员象征着坚韧和勤奋，这也符合了因辛劳工作而产生愁容的概念。
马（苦脸马）:
马在中国文化中被视为努力工作和辛勤劳动的象征。“苦脸马”则形象地传达出那种因为过度劳累和工作压力导致的面部表情——即“愁眉苦脸”，这里的“苦脸”直接对应于马的这一特性。
狗:
狗因其对人类情感十分敏感的特性，容易流露出担忧或不安的表情，因此也被用来比喻“愁眉苦脸”的状态，特别是在某些情境下如看到主人不快时表现出明显的焦虑情绪。
然而值得注意的是,"愁眉苦脸"并非特指某一个生肖绝对性地最贴切；它更多地是一种通过联想不同生肖特征和文化寓意所形成的综合印象。"兔"，尤其是由于民间有关于兔子胆小易多思的说法以及它们下垂耳朵的外貌特点，在某些语境中也可能会被认为是“最愁容满面”的生肖之一。
